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一种快速提取植物叶片总蛋白的方法



专利号 CN201811420355.0

专利名称 一种快速提取植物叶片总蛋白的方法

专利类型 发明 

年份 2019 

公开号 CN109180793A

公开日 2019.01.11

主分类号 C07K14/415

分类号 C07K14/415  C07K1/14  G01N33/68 

申请日 2018.11.26

申请人 福建农林大学 

国家省市 福建  35 

联系地址 350002 福建省福州市仓山区上下店路15号

发明人 方长旬  张鹏丽  杨陆可  李兰兰  林文雄 

代理人 蔡学俊

代理机构 福州元创专利商标代理有限公司 35100

内容摘要 本发明提供一种快速提取植物叶片总蛋白的方法,包括先将植物叶片在液氮条件下用竹签手工捻转研磨以快速破碎,进一步加入含有SDS和β-巯基乙醇的裂解液,于100℃条件下裂解细胞游离蛋白,最后常温离心获得蛋白溶液,用于SDS-PAGE电泳及下游的相关试验。本方法适用于拟南芥、烟草、水稻等多种植物叶片总蛋白的提取,建立了一种操作流程简易、制备样品快速、总量高的提取技术,能够为供体植物目标蛋白的快速检测提供重要基础。

主权利要求 1.一种快速提取植物叶片总蛋白的方法,其特征在于,包含以下步骤:(1)植物叶片组织的破碎:取25~50 mg的植物鲜叶片于1.5mL 离心管中,液氮速冻,利用竹签捻转研磨方法,将叶片磨成粉末;(2)组织裂解:在步骤(1)装有粉末的离心管中加入组织样品粉末体积0.8~1倍的裂解液,轻轻混匀,将离心管用防爆夹套紧后置于100℃金属浴中热煮,在煮4~5min时将离心管取出轻轻弹匀后继续热煮;在热煮时间为8~10min时取出,冷却至室温;(3)蛋白游离:28℃ 13000rpm下离心 10min,吸取上清,得到含有植物组织总蛋白的溶液,-20℃保存,用于后续的SDS-PAGE电泳及下游试验。

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